SPE是近二十年来得到快速发展应用的理化检测样品前处理方法之一，我们将传统SPE填料设计成拥有永磁性的分撒萃取试剂，并结合自动化设备的研发和应用，形成磁性萃取方法和系统（mSPE）。
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AUTO M32全自动萃取 |
mSPE极大地提高了实验室生产力，有效节约人力成本，并显著降低人为因素在前处理中的影响。
本文选取了治疗癫痫的五种常用精神类药物（下表），建立mSPE样品处理方法，并对其进行了基本的方法学验证。
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名称 |
缩写 |
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左乙拉西坦 |
LEV |
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拉莫三嗪 |
LTG |
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奥卡西平代谢物 |
MHD |
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苯巴比妥 |
PHB |
|
托吡酯 |
TPM |
仪器和材料
磁性固相萃取剂：HLB
全自动提取仪：AUTO M32
LC-MS/MS：SCIEX 4500
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HLB磁性萃取填料 |
样品处理
取200 μL血浆，加入400μL去离子水，混匀备用。在1#孔位放入2 mg HLB磁性固相萃取剂。按右表所示，移取溶剂和样品液于AUTO M32专用96孔板的对应孔位，并设定方法。点击开始运行mSPE。
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孔位 |
步骤 |
溶液 |
体积（μL） |
振荡（s） |
静置（s） |
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1 |
活化 |
甲醇 |
200 |
30 |
30 |
|
2 |
平衡 |
水 |
600 |
30 |
30 |
|
3 |
上样 |
样品液 |
600 |
30 |
30 |
|
4 |
淋洗 |
水 |
200 |
30 |
30 |
|
5 |
洗脱 |
乙腈 |
1000 |
30 |
30 |
|
2 |
排废 |
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自动运行完成后，移取5#列孔位的样品洗脱液，置于1.5 mL玻璃样品瓶内，进样LC-MS/MS。
数据与讨论
下表为五种抗癫痫药物的标准曲线（ng/mL）及其准确度(%)。
左乙拉西坦
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Actual Conc. |
Cal. Conc. |
Accuracy |
|
L1 |
100 |
100.8 |
100.8 |
|
L2 |
200 |
199.8 |
99.9 |
|
L3 |
500 |
497.2 |
99.4 |
|
L4 |
1000 |
900.6 |
90.1 |
|
L5 |
2000 |
2073.7 |
103.7 |
|
L6 |
4000 |
4243.9 |
106.1 |
拉莫三嗪
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Actual Conc. |
Cal. Conc. |
Accuracy |
|
L1 |
/ |
/ |
/ |
|
L2 |
0.2 |
0.17 |
84.6 |
|
L3 |
0.5 |
0.51 |
108.2 |
|
L4 |
1 |
0.93 |
93.1 |
|
L5 |
2 |
2.05 |
102.5 |
|
L6 |
4 |
3.94 |
98.6 |
奥卡西平代谢物
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|
Actual Conc. |
Cal. Conc. |
Accuracy |
|
L1 |
50 |
51.8 |
103.5 |
|
L2 |
100 |
93.3 |
93.3 |
|
L3 |
250 |
250.5 |
100.2 |
|
L4 |
500 |
475.7 |
95.1 |
|
L5 |
1000 |
1030.9 |
103.1 |
|
L6 |
2000 |
2095.0 |
104.7 |
苯巴比妥
|
|
Actual Conc. |
Cal. Conc. |
Accuracy |
|
L1 |
100 |
94.2 |
94.2 |
|
L2 |
200 |
221.7 |
110.9 |
|
L3 |
400 |
419.4 |
104.8 |
|
L4 |
1000 |
1000.7 |
100.1 |
|
L5 |
2000 |
1548.9 |
87.4 |
|
L6 |
4000 |
4504.9 |
112.6 |
托吡酯
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|
Actual Conc. |
Cal. Conc. |
Accuracy |
|
L1 |
100 |
106.4 |
106.4 |
|
L2 |
200 |
171.3 |
85.7 |
|
L3 |
400 |
411.0 |
102.7 |
|
L4 |
1000 |
1028.2 |
102.8 |
|
L5 |
2000 |
1775.7 |
88.8 |
|
L6 |
4000 |
4542.5 |
113.6 |
血浆样品添加4000ng/mL五种药物，同上述步骤，使用AUTO M32做样品自动处理。如下表，回收率在87.1~129%。
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LEV |
LTG |
MH |
PHB |
TMP |
|
回收率（%） |
87.1 |
117 |
116 |
96.3 |
129 |
|
RSD（%） n=2 |
0.02 |
15 |
19 |
2.4 |
9.0 |
结果和讨论
使用HLB聚合物磁性萃取剂，结合AUTO M32萃取仪，可在20分钟内运行一批次32个样本的全自动固相萃取样品处理。期间，无需人为干预，无需正压或负压驱动的液流操作。一键点击开始运行直至处理完成，洗脱液直接上机LC-MS/MS分析。mSPE作为一种全新的自动化样品前处理手段，线性良好，结果准确精密，达到了定量分析的基本方法学要求。
参考信息
点击http://www.pureton.com.cn/prolist_t53.html获取产品信息，或致电4001-520-260联系普敦实验室设备（上海）有限公司。
